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digamos que temos aqui alguns frascos cujas soluções contém fragmentos de dna temos a curiosidade de saber o que acontece no primeiro frasco com longos são os fragmentos quantos pares de base nos apresentam você pode se perguntar por que não tirá los e contá los exceto pelo fato de que eles são dimensões incrivelmente pequenas e de difícil interação mesmo fragmento bastante grande na ordem de 5 mil pares de base terá aproximadamente 12 micrômetros de comprimento se esticasse mos temos essa dificuldade toda mesmo se ignorarmos o com fino é o diâmetro real apenas considerando o seu cumprimento ou seja 1 a 2 micrômetros isso é muito pequeno é um a dois milionésimos de milímetro então este cara o fragmento isto é tentar a manipulá lo fisicamente com nossas mãos ou com ferramentas grosseiras é uma estratégia que não vai nos ajudar de forma alguma então como vamos fazer isso a técnica que vamos usar a chamada eletroforese em gel pode ser utilizada para descobrimos o tamanho tanto de cadeias de dna quanto drn a de proteínas enfim de qualquer uma dessas macromoléculas ela recebe esse nome pois envolve o transporte gerado por cargas elétricas que ocorre em gel daí o nome eletroforese engel o equipamento envolvida na eletroforese em gel está representado aqui temos em seu interior já embebido por uma solução tampão hoje é mais comumente utilizado o polissacarídeo gelatinoso chamado agarose extraído de algas marinhas então ou recolher um pouco da mostra número um e colocar aqui nessa parte do gel vou fazer o mesmo com a mostra número 2 colocar aqui ao lado também no gel e por fim fazer o mesmo com a mostra número 3 inserindo ao lado das demais também no gel e tudo isso está banhado da solução tampão que apenas água com um pouco de sal na qual o ph será mantido dentro de uma faixa de variação aceitável e não irá interferir no dna o que poderia acontecer caso a solução ficasse muito ajudou muito básica agora vamos aplicar a voltagem nessa solução contendo gel de modo que a porção onde inserimos o dna será o pólo negativo extremidade oposta será o pólo positivo você se lembra que como visto em aulas anteriores o dna quando em ph fisiológico apresenta carga negativa devido à presença de grupos fosfatos em sua cadeia principal o que fazemos com a solução tampão é garantir que o ph fique dentro da faixa fisiológica garantido consequentemente que o dna ter a carga negativa assim quando aplicamos uma voltagem ao sistema o dna irá migrar do pólo negativo ao pólo positivo vamos pensar sobre o que vai acontecer então lembre se que a voltagem vai estabelecer uma força elétrica em corta os dotados de carga conduzindo os a região de menor potencial mas no caso aqui em questão o dna é dotado também de massa estabelecendo uma força gravitacional ao centro da terra e não ao pólo positivo do gel uma vez que a relação de carga por massa é a mesma quanto menor o fragmento de dna menor sua força gravitacional impedindo seu movimento e então mais longe o fragmento irá migrar no gel de eletroforese devido às forças elétricas isso tudo faz ainda mais sentido se lembrarmos que o gel de agarose é um polissacarídeo de que em temas moleculares é uma espécie de maiô rede que tem de a barrar o avanço das moléculas ou seja quanto menor a molécula mas ela consegue atravessar as lacunas de rede de polissacarídeos da gasosa as pessoas ainda estão estudando o mecanismo exato desse processo mas aparentemente o que determinou com longe a molécula migra é só a quantidade de massa e não só a quantidade de carga desta maneira veremos após um certo tempo em nosso gel submetido à tensão elétrica que as amostras migram cada uma de uma forma formando diferentes bandas amostra representada quem azul migrou mais longe que a verde e essas duas ficaram em posição intermediária entre representantes da mostra laranja temos aqui que a mostra laranja contém bandas que migraram pouco outras um pouquinho mais e outras migraram mais que as bandas verde e azul como essa aqui logo podemos inferir que o menor fragmento está presente na mostra laranja que migrou mais assim como que a mostra azul contém fragmentos de dna menores mais curtos que a mostra verde ainda os fragmentos da mostra azul e verde são menores que esses dois fragmentos da mostra laranja uma vez que estes migraram - e provavelmente são maiores mais pesados mais longos feito isso ainda resta saber como realmente meditai fragmentos isso você pode encontrar em soluções padronizadas que são chamadas de escadas de dna representadas aqui no canto em rosa no gel a escada de dna contém fragmentos de tamanhos conhecidos e conforme sua migração eletroforese engel podemos comparar suas bandas formadas conforme seu alinhamento com as bandas da mostra que estamos estudando os fragmentos da escada de dna conforme já falei são padronizados e também rotulados e você pode escolher qual prefere para comprar suponhamos que em nosso experimento compramos uma mostra de escada de dna em que o maior fragmento apresenta cinco mil pares de base intermediário apresenta 1501 menor apresenta 500 pares de base então compramos nossas amostras e temos uma noção aproximada do tamanho de cada fragmento por exemplo o fragmento azul deve ter entre 500 pares de base e 1.500 pares de base pois encontra se em posição intermediária essas duas bandas rosa você pode ter noções cada vez mais precisas conforme escala de dna que você insere em seu gel outra coisa interessante de se notar é que quando você vê uma banda o que ela representa é apenas uma fita de dna na verdade a banda formada por muitas e muitas moléculas de dna lembre se que um fragmento de 500 pares de base tem algo em torno de 1 a 2 micrômetros e - se você esticar se não seria capaz de vê lo a olho nu portanto a banda formada por muitas mãos é quase dna que migram distâncias muito próximas pelo gel de acordo com a semelhança entre a sua massa quando submetido a voltagem agora a última coisa que você provavelmente está se perguntando é como é que eu estou conseguindo ver esse dna no gel então uma vez que elas são moléculas tão pequenas a resposta é que se coloca o marcador no dna tornando visível como um corante o algo que o torna florescente o marcador típico é o brometo de tijolo que como você vê aqui pode ser chamado de agente de intercalação uma vez que têm a capacidade de intercalar se entre duas cadeias principais de dna como você pode ver aqui a esquerda ea direita quando aplicado prometo detido ontem n a amostra se torna fluorescente sob luz ultravioleta logo basta aplicarmos luso ver no gel para observamos as bandas se você quiser saber como se parece isso na vida real temos aqui uma foto de uma eletroforese engel observa esquerda a escada de dna que se inicia aqui e tem a migração de suas bandas com tamanhos padronizados talvez sejam essas as medidas dos segmentos padronizados da escada de dna por exemplo aqui com 5 mil para de base aqui com 1.500 pares de base finalmente 500 pares de base com respondendo as bandas encontrados ao lado dos números então suponha que tenhamos colocado alguma amostra de dna aqui e após um tempo seus fragmentos migraram quase tanto quanto a banda padronizado de 500 para de base com tendo portanto um pouco mais de 500 mas com certeza muito menos que 1.500 pares de base de maneira semelhante suponha que na mesma mostra uma certa banda migrou até exatamente aqui bem na linha de 1.500 pares de base indicando que esse é o tamanho desse segmento você provavelmente já viu isso como quando as pessoas falam sobre a análise genética teste de paternidade todos feitos em eletroforese gel e agora você sabe o que realmente está acontecendo aqui isso não é uma cadeia de dna pois ela é muito grande você pode vê lá é na verdade várias e várias moléculas de dna que com massa semelhante migram conjuntamente sob efeito da tensão elétrica e formam bandas cujas posições depois de um determinado tempo indicam aproximadamente seu tamanho logo as moléculas de dna com suas cargas negativas migram do pólo negativo em direção ao pólo positivo sendo que as menores moléculas alcançam maiores distâncias ao longo da malha de agarose